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紫外可見分光光度計的定量分析方法

更新時間:2025-05-06點擊次數:2444
紫外可見分光光度計的定量分析方法是基于朗伯-比爾定律(A=εbc)展開的,通過測定溶液對特定波長光的吸光度來計算物質濃度,其核心方法及要點如下:  
一、標準曲線法(常用方法)  
操作步驟  
配制系列標準溶液(濃度梯度已知)。  
在選定波長下,依次測定各標準溶液的吸光度。  
以吸光度為縱坐標、濃度為橫坐標繪制標準曲線。  
測量待測樣品吸光度,通過曲線查得濃度。  
適用場景  
適用于樣品與標準物質化學性質相似、無顯著干擾的情況。  
需保證標準曲線線性良好(R²≥0.999),濃度范圍覆蓋待測值。  
注意事項  
需定期校準儀器,確保吸光度測量精度。  
避免標準溶液濃度過高導致偏離線性范圍。  
二、標準加入法(克服基體干擾)  
操作步驟  
測量待測樣品原液的吸光度(A?)。  
向原液中加入不同體積的標準溶液,配制系列加標樣品,分別測量吸光度(A?,A?,...)。  
以加入標準溶液濃度為橫坐標、吸光度為縱坐標繪制工作曲線,外推至橫軸交點即為待測物濃度。  
適用場景  
適用于樣品基體復雜、背景吸收顯著的情況。  
可有效消除基體效應對測定的干擾。  
注意事項  
需保證加標體積遠小于樣品體積(通常≤10%)。  
外推法依賴線性假設,需驗證工作曲線線性。  
三、吸收系數法(直接計算法)  
操作步驟  
測定待測溶液在特定波長下的吸光度(A)。  
已知物質的摩爾吸光系數(ε)和液層厚度(b),通過公式c=A/(εb)計算濃度。  
適用場景  
適用于ε值準確已知的純物質分析。  
無需繪制標準曲線,操作簡便快捷。  
注意事項  
ε值受溫度、溶劑、pH等因素影響,需嚴格控制實驗條件。  
僅適用于單一組分或組分間無光譜干擾的情況。  
四、多組分同時測定法(復雜體系分析)  
雙波長法  
選擇兩個波長(λ?、λ?),使其中一物質在λ?有吸收、另一物質在λ?有吸收。  
通過聯立方程消除干擾組分影響,分別計算各組分濃度。  
三波長法  
適用于嚴重重疊光譜,通過三個波長下的吸光度值建立方程組求解。  
導數光譜法  
利用吸光度對波長的導數(如一階、二階導數)消除背景干擾,提高分辨率。  
五、方法選擇依據  
樣品特性  
簡單體系:優先選用標準曲線法或吸收系數法。  
復雜基體:采用標準加入法或多組分分析法。  
分析目的  
快速篩查:吸收系數法更高效。  
精準定量:標準曲線法或標準加入法更可靠。  
儀器條件  
需保證儀器波長準確度(±0.3nm)、吸光度精度(±0.002Abs)。  
比色皿需匹配波長范圍(石英用于紫外區,玻璃用于可見區)。
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